2 - Elaborer un protocole d'analyse par chromatographie sur couche mince et le réaliser (25 minutes conseillées)
Question
Proposer un protocole pour réaliser une chromatographie sur couche mince permettant de contrôler l'efficacité du lavage. Il faudra dissoudre les échantillons choisis dans des tubes à hémolyse en ajoutant environ 1 mL d'acétone. On dispose d'une lampe UV.
Solution partielle n°1 : On va déposer sur la plaque de silice trois dépôts : le solide lavé, le solide brut, l'aldéhyde salicylique. Ces trois espèces seront dissoutes dans quelques millilitres d'acétone.
Solution partielle n°2 : À l'aide d'un tube capillaire, faire sur la plaque CCM un dépôt de 1 à 2 mm de diamètre de la solution de solide lavé, de solide brut et de l'aldéhyde salicylique.
Solution complète
Préparer une solution de 3-carbéthoxycoumarine en ajoutant environ 2 mL d'acétone dans un tube à hémolyse contenant un peu de solide. Tracer délicatement un trait sur la plaque CCM à un centimètre du bord inférieur de la plaque. Repérer les futures positions des dépôts.
À l'aide d'un tube capillaire, faire un dépôt de 1 à 2 mm de diamètre sur la plaque CCM pour la solution de 3-carbéthoxycoumarine, l'aldéhyde salicylique et le solide brut. Placer la plaque CCM dans la cuve de chromatographie.
Laisser s'effectuer l'élution jusqu'à ce que l'éluant arrive à un centimètre du bord supérieur de la plaque. Repérer la limite d'élution à l'aide d'un trait. Laisser s'évaporer l'éluant sur la plaque puis la placer sous une lampe UV. Entourer les différentes tâches.
Appel n°1
Appeler le professeur pour lui présenter le protocole d'analyse par CCM
Lors de cet appel, la compétence ANALYSER est évaluée.
Le critère retenu pour l'évaluation de la compétence ANALYSER est le suivant : concevoir un protocole expérimental.
L'examinateur évalue globalement ce que lui présente le candidat. Il attend de la part de celui-ci : qu'il propose un protocole expérimental pertinent, réalisable au laboratoire pour faire une analyse CCM du produit lavé.
Ainsi, le protocole devra indiquer :
- Le nombre et la nature des échantillons déposés sur la plaque (solide lavé, solide avant le lavage, aldéhyde salicylique),
- la préparation des échantillons,
- le dépôt des échantillons sur la plaque CCM (1cm du bord inférieur, sur la même ligne, les dépôts sont régulièrement espacés) et leur repérage,
- la mise en place de la plaque dans la cuve,
- l'élution,
- le retrait de la plaque, le repérage du front de l'éluant,
- la révélation.
Si certains points du protocole sont flous ou non présents, l'examinateur pourra les faire préciser au candidat à l'aide de questions ouvertes.
Il est important que le candidat pense à faire une analyse comparative du produit lavé, du produit avant lavage et de l'aldéhyde salicylique.
L'examinateur attend que le candidat sache corriger seul une maladresse ou apporte seul un complément au protocole lors des appels. Si le candidat y parvient le niveau acquis pour ANA est le niveau A.
Si malgré le questionnement ouvert de l'examinateur, le protocole est toujours incomplet, l'examinateur fournit au candidat une solution partielle adaptée en fonction des besoins du candidat. Le niveau acquis est alors le niveau B. Le niveau acquis est C si l'examinateur doit apporter au candidat des réponses partielles pour parvenir à terminer la tâche demandée. Si le candidat ne parvient pas à établir le protocole demandé à partir des solutions partielles, l'examinateur lui donne la solution totale. Le niveau acquis est le niveau D.
Question
Après validation, réaliser le protocole de CCM.
Solution partielle n°1 : Il faut que la ligne de dépôt soit au-dessus du niveau de l'éluant.
Solution partielle n°2 : Il faut retirer la plaque CCM avant que l'éluant arrive en haut de la plaque.
Solution partielle n°3 : Il faut révéler le chromatogramme en utilisant la lampe UV.
Solution complète
L'examinateur doit fournir dans ce cas au candidat une plaque CCM sur laquelle un échantillon de produit lavé, de solide brut et d'aldéhyde salicylique ont été analysés et révélés.
